高效液相色譜是一種高效、精準的色譜分離技術(shù)，被廣泛應用于藥物分析、生化標志物檢測、環(huán)境污染物檢測等領(lǐng)域。下面將介紹高效液相色譜系統(tǒng)的操作方法。
 

　　I.原料準備
 

　　1.溶劑：高純度有機溶劑，如純度達到HPLC級別的甲醇、乙腈、乙醇等。
 

　　2.樣品：要求樣品在水中溶解度較高，通常采用精密天平稱取數(shù)毫克的樣品，加入適量的有機溶劑中，并攪拌均勻。
 

　　3.內(nèi)標：內(nèi)標的加入可提高分析方法的準確度和精確度，如對組蛋白酶結(jié)合位點的鋅離子測定操作，可加入5-氧化-硫代硫糖酸(5-OSA)作為內(nèi)標。
 

　　II.儀器操作
 

　　1.開機：打開HPLC系統(tǒng)電源，啟動軟件，確認參數(shù)設置無誤。
 

　　2.準備流動相：按照實驗方案中流動相的比例將水、有機溶劑調(diào)配好。將混合好的流動相用過濾器過濾，并用氣流除去氣泡，以免影響儀器和分析結(jié)果。
 

　　3.填充色譜柱：色譜柱是HPLC系統(tǒng)的核心部件。填充色譜柱前，將色譜柱和進樣器、檢測器與儀器連接好。將色譜柱加熱至適宜的溫度后，開啟泵浦，將流動相通過色譜柱包層填充物，直至色譜柱內(nèi)充滿。
 

　　4.樣品處理：可采用樣品預染色、前處理、提取等方法，以保證色譜分析數(shù)據(jù)的準確性和可靠性。
 

　　5.樣品進樣：將樣品針頭插入進樣口，將樣品推入進樣器中，通過手動或自動進樣器，將樣品送入色譜柱進行分離。
 

　　6.檢測：將檢測器的信號記錄下來，經(jīng)過數(shù)據(jù)處理和分析，得出樣品中目標分量的濃度或含量。
 

　　III.實驗結(jié)果分析
 

　　1.結(jié)果判定：分析結(jié)果中，樣品和內(nèi)標物的峰形、峰高、保留時間等是判斷分析結(jié)果是否準確、可靠的關(guān)鍵。
 

　　2.分析數(shù)據(jù)處理：對于分析結(jié)果，應進行合理的數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析，通過計算、繪圖等方法，得出樣品中目標分量的含量、純度等數(shù)據(jù)。
 

　　綜上所述，高效液相色譜操作方法需要嚴格按照實驗方案進行，有機溶劑、樣品、內(nèi)標等原料的使用要求嚴格，同時要認真操作儀器，遵守維護要求，確保實驗結(jié)果的準確性和可靠性。